| http://dbpedia.org/ontology/abstract
|
Ligation-independent cloning (LIC) is a fo … Ligation-independent cloning (LIC) is a form of molecular cloning that is able to be performed without the use of restriction endonucleases or DNA ligase. The technique was developed in the early 1990s as an alternative to restriction enzyme/ligase cloning. This allows genes that have restriction sites to be cloned without worry of chopping up the inserted gene of interest.chopping up the inserted gene of interest.
, Безлигазное клонирование (англ. LIC, Ligat … Безлигазное клонирование (англ. LIC, Ligation Independent Cloning), в генетической инженерии — метод получения плазмид, при котором не используются реакции рестрикции и лигирования. Технология безлигазного клонирования позволяет сократить время создания новых генетических конструкций, например, для экспрессии рекомбинантного белка и наилучшим образом подходит для высокопроизводительной линии производства белков. Для безлигазного клонирования необходимо подготовить LIC-вектор — линеаризованную последовательность ДНК со специфичными липкими концами длиной 11-14 нуклеотидов. Для этого векторную молекулу гидролизуют рестриктазой по одному сайту, затем обрабатывают ДНК-полимеразой фага Т4 в присутствии одного из нуклеотидов. 3'-экзонуклеазная активность этого фермента приводит к удалению нуклеотидов с 3'-конца до тех пор, пока в последовательности не встретится имеющийся в реакционной смеси нуклеотид (см. рисунок). Векторная молекула специально подготовлена таким образом, что по обе стороны от сайта рестрикции на протяжении 11-14 звеньев данный нуклеотид не встречается. После выделения LIC-вектора его можно хранить и многократно использовать для клонирования в него генов целевых белков. Праймеры для ПЦР этих генов выбираются таким образом, чтобы с одной стороны они были комплементарны началу или концу целевого гена, а с другой — липким участкам LIC-вектора. Тогда после ПЦР получается ген белка, у которого с обеих сторон присутствуют одноцепочечные последовательности длиной 11-14 нуклеотидов, комплементарные векторным. Достаточно смешать такой продукт с вектором и трансформировать смесью компетентные клетки бактерии, чтобы получить плазмиды с геном белка. Таким образом, безлигазное клонирование позволяет избежать нескольких стадий рестрикции, выделения из геля и лигирования, каждая из которых может стать причиной неудачного клонирования.ет стать причиной неудачного клонирования.
|
| http://dbpedia.org/ontology/wikiPageExternalLink
|
http://bitesizebio.com/2008/02/18/ligation-independent-cloning-primer-design/ +
|
| http://dbpedia.org/ontology/wikiPageID
|
23376161
|
| http://dbpedia.org/ontology/wikiPageLength
|
1741
|
| http://dbpedia.org/ontology/wikiPageRevisionID
|
937270355
|
| http://dbpedia.org/ontology/wikiPageWikiLink
|
http://dbpedia.org/resource/Category:Molecular_biology +
, http://dbpedia.org/resource/DNA_ligase +
, http://dbpedia.org/resource/Molecular_cloning +
, http://dbpedia.org/resource/Restriction_endonucleases +
, http://dbpedia.org/resource/Category:Cloning +
|
| http://dbpedia.org/property/wikiPageUsesTemplate
|
http://dbpedia.org/resource/Template:Clarify +
, http://dbpedia.org/resource/Template:Reflist +
|
| http://purl.org/dc/terms/subject
|
http://dbpedia.org/resource/Category:Cloning +
, http://dbpedia.org/resource/Category:Molecular_biology +
|
| http://purl.org/linguistics/gold/hypernym
|
http://dbpedia.org/resource/Form +
|
| http://www.w3.org/ns/prov#wasDerivedFrom
|
http://en.wikipedia.org/wiki/Ligation-independent_cloning?oldid=937270355&ns=0 +
|
| http://xmlns.com/foaf/0.1/isPrimaryTopicOf
|
http://en.wikipedia.org/wiki/Ligation-independent_cloning +
|
| owl:sameAs |
http://rdf.freebase.com/ns/m.06w5_df +
, http://www.wikidata.org/entity/Q4080921 +
, https://global.dbpedia.org/id/3nEyg +
, http://ru.dbpedia.org/resource/%D0%91%D0%B5%D0%B7%D0%BB%D0%B8%D0%B3%D0%B0%D0%B7%D0%BD%D0%BE%D0%B5_%D0%BA%D0%BB%D0%BE%D0%BD%D0%B8%D1%80%D0%BE%D0%B2%D0%B0%D0%BD%D0%B8%D0%B5 +
, http://dbpedia.org/resource/Ligation-independent_cloning +
|
| rdfs:comment |
Ligation-independent cloning (LIC) is a fo … Ligation-independent cloning (LIC) is a form of molecular cloning that is able to be performed without the use of restriction endonucleases or DNA ligase. The technique was developed in the early 1990s as an alternative to restriction enzyme/ligase cloning. This allows genes that have restriction sites to be cloned without worry of chopping up the inserted gene of interest.chopping up the inserted gene of interest.
, Безлигазное клонирование (англ. LIC, Ligat … Безлигазное клонирование (англ. LIC, Ligation Independent Cloning), в генетической инженерии — метод получения плазмид, при котором не используются реакции рестрикции и лигирования. Технология безлигазного клонирования позволяет сократить время создания новых генетических конструкций, например, для экспрессии рекомбинантного белка и наилучшим образом подходит для высокопроизводительной линии производства белков. Для безлигазного клонирования необходимо подготовить LIC-вектор — линеаризованную последовательность ДНК со специфичными липкими концами длиной 11-14 нуклеотидов. Для этого векторную молекулу гидролизуют рестриктазой по одному сайту, затем обрабатывают ДНК-полимеразой фага Т4 в присутствии одного из нуклеотидов. 3'-экзонуклеазная активность этого фермента приводит к удалению нуклео этого фермента приводит к удалению нуклео
|
| rdfs:label |
Безлигазное клонирование
, Ligation-independent cloning
|
